將有機(jī)官能團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到硅膠表面的游離羥基上而形成的固定相稱為化學(xué)鍵合相。這類固定相的突出特點(diǎn)是耐溶劑沖洗，并且可以通過改變鍵合相有機(jī)官能團(tuán)的類型來改變分離的選擇性。
1.鍵合相的性質(zhì)
   目前，化學(xué)鍵合相廣泛采用微粒多孔硅膠為基體，用烷烴二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷與硅膠表面的游離硅醇基反應(yīng)，形成Si-O-Si-C鍵形的單分子膜而制得。硅膠表面的硅醇基密度約為5個(gè)/nm2，由于空間位阻效應(yīng)（不可能將較大的有機(jī)官能團(tuán)鍵合到全部硅醇基上）和其它因素的影響，使得大約有40~50%的硅醇基未反應(yīng)。
   殘余的硅醇基對(duì)鍵合相的性能有很大影響，特別是對(duì)非性鍵合相，它可以減小鍵合相表面的疏水性，對(duì)性溶質(zhì)（特別是堿性化合物）產(chǎn)生次級(jí)化學(xué)吸附，從而使保留機(jī)制復(fù)雜化（使溶質(zhì)在兩相間的平衡速度減慢，降低了鍵合相填料的穩(wěn)定性。結(jié)果使堿性組分的峰形拖尾）。為盡量減少殘余硅醇基，一般在鍵合反應(yīng)后，要用*基氯硅烷（TMCS）等進(jìn)行鈍化處理，稱封端（或稱封尾、封頂，end-capping），以提高鍵合相的穩(wěn)定性。另一方面，也有些ODS填料是不封尾的，以使其與水系流動(dòng)相有更好的"濕潤(rùn)"性能。
   由于不同生產(chǎn)廠家所用的硅膠、硅烷化試劑和反應(yīng)條件不同，因此具有相同鍵合基團(tuán)的鍵合相，其表面有機(jī)官能團(tuán)的鍵合量往往差別很大，使其產(chǎn)品性能有很大的不同。鍵合相的鍵合量常用含碳量（C%）來表示，也可以用覆蓋度來表示。所謂覆蓋度是指參與反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。
   pH值對(duì)以硅膠為基質(zhì)的鍵合相的穩(wěn)定性有很大的影響，一般來說，硅膠鍵合相應(yīng)在pH=2~8的介質(zhì)中使用。　
2.鍵合相的種類
   化學(xué)鍵合相按鍵合官能團(tuán)的性分為性和非性鍵合相兩種。
   常用的性鍵合相主要有氰基（-CN）、氨基（-NH2）和二醇基（DIOL）鍵合相。性鍵合相常用作正相色譜，混合物在性鍵合相上的分離主要是基于性鍵合基團(tuán)與溶質(zhì)分子間的氫鍵作用，性強(qiáng)的組分保留值較大。性鍵合相有時(shí)也可作反相色譜的固定相。
   常用的非性鍵合相主要有各種烷基（C1~C18）和苯基、苯甲基等，以C18應(yīng)用zui廣。非性鍵合相的烷基鏈長(zhǎng)對(duì)樣品容量、溶質(zhì)的保留值和分離選擇性都有影響，一般來說，樣品容量隨烷基鏈長(zhǎng)增加而增大，且長(zhǎng)鏈烷基可使溶質(zhì)的保留值增大，并常常可改善分離的選擇性；但短鏈烷基鍵合相具有較高的覆蓋度，分離性化合物時(shí)可得到對(duì)稱性較好的色譜峰。苯基鍵合相與短鏈烷基鍵合相的性質(zhì)相似。
   另外C18柱穩(wěn)定性較高，這是由于長(zhǎng)的烷基鏈保護(hù)了硅膠基質(zhì)的緣故，但C18基團(tuán)空間體積較大，使有效孔徑變小，分離大分子化合物時(shí)柱效較低。
3.固定相的選擇
   分離中等性和性較強(qiáng)的化合物可選擇性鍵合相。氰基鍵合相對(duì)雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性。氨基鍵合相具有較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力，對(duì)某些多官能團(tuán)化合物如甾體、強(qiáng)心甙等有較好的分離能力；氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，故被廣泛用于糖類的分析，但它不能用于分離羰基化合物，如甾酮、還原糖等，因?yàn)樗鼈冎g會(huì)發(fā)生反應(yīng)生成Schiff 堿。二醇基鍵合相適用于分離有機(jī)酸、甾體和蛋白質(zhì)。
   分離非性和性較弱的化合物可選擇非性鍵合相。利用特殊的反相色譜技術(shù)，例如反相離子抑制技術(shù)和反相離子對(duì)色譜法等，非性鍵合相也可用于分離離子型或可離子化的化合物。ODS（octadecyl silane）是應(yīng)用的非性鍵合相，它對(duì)各種類型的化合物都有很強(qiáng)的適應(yīng)能力。短鏈烷基鍵合相能用于性化合物的分離，而苯基鍵合相適用于分離芳香化合物。
   另外，美國(guó)藥典對(duì)色譜法規(guī)定較嚴(yán)，它規(guī)定了柱的長(zhǎng)度，填料的種類和粒度，填料分類也較詳細(xì)，這樣使色譜圖易于重現(xiàn)；而中國(guó)藥典僅規(guī)定填料種類，未規(guī)定柱的長(zhǎng)度和粒度，這使檢驗(yàn)人員難于重現(xiàn)實(shí)驗(yàn)，在某些情況下還浪費(fèi)時(shí)間和試劑。